動物醫療

兔實驗性絲球體腎炎之研究

本論文之主畏內容包括:
1.實驗性絲球體腎炎之引起
以無血之兔腎皮質部懸浮液,加上完全的加強劑,兔疫健康的狗。以免疫擴散法(
Ouchterlong Immurodiffucion Method測定所引起的抗體之力價。然後大量採取犬血
清,以不同的方式靜脈注射兔子,使之產生急性或慢性絲球體腎炎。定期檢查血液中
各項成分之變化。
2.絲球體腎之證明
以免疫螢光抗體法證明所引起者確實為抗絲絿體基膜病,方法為以FITC標定在抗體上(
用Medified Marshall's Method) 再用膠濾過法取得標定螢光色素之抗體。以冷凍切
片法切取正常之函腎組織,再以螢光抗體染色之。
3.有效植物之篩別試驗
以兔仔菜、八角蓬、煮花仔草、水丁香、毬蘭及南洋瓊蘭等六種藥用植物之抽出液,經
冷凍乾燥後,溶於蒸餾水內,經Milipere濾過後,行靜脈注射於已經過抗血清注射之
實驗兔子體內,然後定期抽血、測血中尿素氮(BUN) 值。
4.治療效果之病理學研究
以1.法引起急性腎炎後,實驗組(投與兔仔菜植物抽出液)及對照組(不投藥)均做

家兔始基生殖細胞體外再程式化與分化能力之研究

始基生殖細胞(primordial germ cells, PGC)是生殖前軀細胞。在體外,PGC能夠再程式化為胚源生殖細胞(embryonic germ cells, EGCs)。本研究為了瞭解家兔PGCs在早期發育階段胚胎體內的遷移過程,首先(試驗一)觀察不同發育天數之家兔胚胎(fetuses)生殖脊與性腺相關構造之形態,作為後續試驗與相關研究之基礎。結果指出,在9.5 dpc前之胚胎生殖脊(genital ridges)其形態無法清晰被分辨與分離,反之,同一發育時期小鼠胚胎生殖脊形態已具基本的輪廓。11.5 dpc是可辨識家兔胚胎生殖脊與中腎(mesonephros)聯合組織發育的最早時間點,而13.5 dpc的兔生殖脊發育形態則與11.5 dpc的小鼠生殖脊形態相似。為期建立體外之EGCs,試驗二乃自12.5 dpc之兔胚胎分離PGC培養於兔胚幹細胞(rabbit embryonic stem cells, rESCs)培養液、添加MEK與GSK3 抑制劑之mouse EGC培養液、mTeSR™培養液或rabbit EGC培養液等處理組;同時也測試最佳之抑制劑與生長因子的添加濃度。

母兔之配種適期與早期兔胚之體外培養

本實驗之目的在於(一)瞭解母兔之性行為,以掌握配種適期,(二)建立母兔超級
排卵模式,(三)建立兔胚於體外培養之系統。而進行一系列之研究:
一、八頭性成熟母兔(7∼8月齡),經連續35日觀察外陰部粘膜顏色變化、配種
行為之接受性、陰道抹片中角質化細胞百分率之變化。結果顯示,性接納行為與外陰
部粘膜顏色之變化頗相一致,外陰部粘膜顏色級次愈高(愈趨向深顏色)時,呈現性
接納行為之百分率愈高,就性接納行為之表現予以歸納成四種類型,(一)持續性(
>30日)性接納行為。(二)長期性(16∼17日)性接納行為和短暫性(3∼
4日)性拒絕行為。(三)短暫性(3∼4日)性接納行為和長期性(16∼17日
)性拒絕行為,(四)長期性(15∼16日)性接納行為和長期性(15∼16日
)性拒絕行為。陰道抹片中角質化細胞之百分率呈現2∼6日之週期性高逢,但與外
陰部紅腫程度之相關不顯著(r=-0﹒12)。母兔表現配種行為接受性期間與拒
絕性期門其陰道抹片中角質化細胞之百分率,並無顯著之差異。另以35頭母兔經記
錄其外陰部粘膜之顏色評級,再予以自然配種或強行配種,並在配種後26hrs ,暴

持續感染於兔睪丸培養細胞之LPC株兔化豬瘟病毒之性狀及其組織培養疫苗之開發

為探討豬瘟病毒在培養細胞內持續感染的特性,及評估以此種病毒開發豬瘟組織培養
疫苗的可能性,將豬瘟兔化疫苗製造用LPC株病毒,直接接種於健康活兔睪丸內。
接種病毒後4天,摘取感染病毒睪丸,施行細胞培養,共每隔4至5天,將持續感染
病毒的兔睪丸細胞(簡稱持續感染細胞,RTP細胞)繼代1次,連續繼代420代

經電子顯微鏡(電顯)觀察,持續感染細胞的細胞質空泡與分泌性小泡內可發現病毒
顆粒。此外,持續感染細胞與同代數的正常兔睪丸細胞比較,其形態、染色體數目及
細胞超顯微結構,均無差異。持續感染細胞和接種A76株豬瘟病毒的RK-15豬
腎株化細胞,經鐵蛋白標示抗體處理後,以免疫電顯法檢查結果,發現鐵蛋白在這兩
種細胞內分佈情形大致相同,除散佈在細胞質外,並且聚積在內質網和粒線體等胞器
的胞膜及核膜上,此外,細胞質空泡內,也可見到與鐵蛋白結合的豬瘟病毒,但在高
氏器胞膜及其小池內存在的類似病毒顆粒,則未與鐵蛋白結合。經此電顯及免疫電顯
等觀察結果,推測豬瘟病毒在細胞核和高氏器之間組成後,進入高氏器,再藉細胞質
空泡或分泌性小泡輸送至細胞膜,釋放於細胞外。

兔日糧中添加不同纖維組成對兔隻生長性狀、營養分消化率、後腸醱酵及腸道組織之影響

本實驗目的在探討兔日糧中添加不同纖維成分,對兔隻生長性狀、營養分消化率、
後腸醱酵及腸道組織之影響。
實驗分三部分進行試驗一及試驗二均採完全逢機設計,以四至八週齡及八至十二週
齡加州種公兔各二十四隻,試驗三以四隻迴腸末端裝置廔管之成熟(三個月齡以上
)加州種公兔,採拉丁方格設計。試驗處理,為日糧中分別添加12%的纖維素,果
膠,木質素及苜蓿,試驗期間,飼料及飲水任食。試驗一及試驗二分別測定生長性
狀及全段消化道之消化率,並於試驗二結束時測定兔隻盲腸內容物之揮發性脂肪酸
組成及腸道組統觀察。試驗三測定全段消化道及迴腸末端消化率。
試驗結果:在生長期及肥育期均顯示木質素處理組之平均每週增重,飼料採食量及
飼料效率較其餘三組差(P<0.05) 。日糧中添加12%果膠顯著降低生長期兔隻之
體增重,飼料採食量及肥育期兔隻之飼料採食量(P<0.05) 。纖維素處理組與苜
蓿粉處理組之間無顯著差異。
消化率之測定;全段消化道所測定之消化率均顯示蛋白質,熱能及乾物質消化率受
不同纖維成分的影響,以木質素處理組顯著降低蛋白質及熱能(P<0.05) 。生長

台灣地區兔子感染兔腦炎微孢子蟲之調查

兔腦炎微孢子蟲(Encephalitozoon cuniculi)是一個普遍感染兔子的微孢子寄生蟲,它也會造成人類腦炎孢子蟲症。目前在台灣尚未有文獻報導,然而在臨床寵物兔病例上有許多疑似感染兔腦炎微孢子蟲症的病例。因此,本論文的目的是在確認台灣地區兔腦炎微孢子蟲的感染病例,進而利用碳分子免疫分析法(Carbon immunoassay; CIA)和酵素免疫分析法(Enzyme-linked immunosorbent assay; ELISA)來調查台灣兔腦炎微孢子蟲之血清陽性率。本研究在一隻具有典型兔腦炎微孢子蟲臨床症狀的兔子,利用組織病理學、組織免疫化學染色法和聚合酶連鎖反應證明了台灣的第一個兔腦炎微孢子蟲感染的病例。在血清學研究方面,171個樣本之碳分子免疫分析法和酵素免疫分析法其陽性率分別為63.2 %(108/171)和 67.8 %(116/171)。其中於14隻有神經症狀的病例中,發現有13隻為兔腦炎微孢子蟲之血清學檢查陽性,其陽性率為92.9 %。統計分析結果亦顯示兔子的性別和品種間在血清陽性率方面沒有明顯差異性;然而在年齡方面,大於4月齡的兔子則會有較高的血清陽性率及明顯的臨床症狀(p < 0.05)。總結以上,本研究確認了台灣首例兔腦炎微孢子蟲症,且於血清學調查結果也顯示於健康兔子有50 % 以上的血清陽性率。

豬瘟病毒對豬隻周邊血液單核細胞活化分子與interferon-g之影響

豬瘟病毒對豬隻免疫系統的傷害為本病主要的致病機制所在。為了探討豬隻的淋巴細胞在豬瘟疫苗或是豬瘟病毒感染後之細胞性免疫之活化狀態,首先利用E2次單位疫苗免疫豬隻,分離周邊血液單核細胞 (peri- pheral blood mononuclear cell;PBMC)進行細胞活化分子CD25與SLA II表現的偵測,結果在免疫後2週內並無法偵測到該兩種分子有明顯表現的情形,另外以豬瘟病毒P.T.株與94.4株進行豬隻之攻毒試驗,免疫組與未免疫之對照組豬隻在攻毒後其PBMC之CD25分子皆無明顯的表現,而SLA II分子的表現在對照組則有明顯被抑制的情形。此外為了探討豬隻在經過E2次單位疫苗或是LPC疫苗免疫之後之細胞性免疫反應,利用純化的豬瘟病毒封套E2醣蛋白進行淋巴增殖試驗,但在實驗結果亦無法偵測到兩組豬隻的PBMC對於該醣蛋白有特異性的增殖反應。

以Saccharomycescerevisiae之b-glucan調控豬隻免疫狀態及其對豬瘟病毒感染之影響

病毒感染後因毒力及與宿主抵抗力交互關係間之消長或平衡,導致宿主恢復、死亡或持續性感染之現象,所牽涉之因子複雜,其中宿主的免疫狀態扮演一重要之角色。本實驗利用免疫調節劑 b-glucan調控宿主之免疫系統,探討其對豬瘟中間毒(S-59)感染之影響。選取15頭健康、三品種(LYD)六週齡豬隻供實驗用,在免疫促進組係以口服酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)之細胞壁,做為免疫誘發物;在免疫抑制組則以肌肉注射合成葡萄糖性類固醇-dexamethasone(1mg / kg體重),以模擬臨床緊迫因子對宿主免疫系統之影響。連續25天處置後,以S-59中間毒2 x 106 PFU肌肉注射攻毒,於攻毒後第0、7、14、21、28、42及56天抽血檢測,計算白血球總數、以流式細胞儀分析淋巴次族群之變化、並利用抗原ELISA、reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR)方法偵測病毒血症及以END法檢測豬瘟中和抗體產生情形。而於攻毒後第14、28、56天分三次淘汰豬隻,進行病理學檢查及利用RT-PCR偵測各實質臟器病毒抗原,以確認病毒分佈之情形。結果顯示:與對照組比較,以S.

HIV-1TAT重組蛋白傳導入哺乳動物細胞之研究

哺乳動物的細胞膜是大部分生物分子 (蛋白質、胜�L)進入細胞內的主要障礙。最近報告指出一些短胜�L序列具有穿越細胞脂質雙層膜的能力,稱之為細胞穿透性胜�L (cell-penetrating peptides;CPPs)。人類免疫缺陷病毒-1型 (HIV-1)的轉譯活化蛋白TAT,由研究報告得知TAT蛋白的鹼性胜�L傳導區 (PTD),是一段僅有11個胺基酸的短胜�L序列 (YGRKKRRQRRR),可穿透細胞生物膜。PTD的特性是帶有多個正電性精胺酸,可能和帶負電性脂質細胞膜的結合很重要。另外以化學鍵結或融合蛋白等方式,TAT-PTD已成功載運許多外源性蛋白進入多種細胞裡,包括體外培養細胞和老鼠活體器官組織細胞。

本實驗為了研究TAT重組蛋白的蛋白質傳導能力,以及外加中心體Aurora-A蛋白過量表現,對於人類子宮頸腫瘤 (HeLa)細胞的作用。我們使用基因重組和蛋白質的純化技術,並利用大腸桿菌表現系統,生產出四種TAT融合蛋白。TAT-HA-GFP蛋白以及TAT-HA-Aurora-A-GFP蛋白,經由蛋白質傳導培養30分鐘後,藉由帶有綠色螢光蛋白 (GFP)的特性,以螢光顯微鏡觀察TAT融合蛋白的傳導行為。

複合式動物移動與震動行為量測技術之研究

動物行為量測在生理學、心理學、藥物學的研究,以及在醫學上各種行為模式的建立,佔有舉足輕重的地位。一個設計精良的動物行為量測系統,不但能降低實驗的複雜性,並且能提供更準確且多樣具代表性的量測參數,增加實驗的效率和可靠度,減少實驗資源的浪費。
本論文在第一部分提出紅外線矩陣與超音波複合式動物行為量測系統的架構,分別以紅外線矩陣和超音波量測動物的移動和震動,並將量測信號以串列資料形態傳進電腦以顯示並儲存。實驗後可立即以LabVIEW所寫的分析軟體來計算動物在位移上的十項參數、重複行為的七項參數、震動的三項參數,以及這些行為參數每十分鐘的改變情形。此外,軟體可將分析結果儲存為文字檔,以提供更進一步的統計。
本論文在第二部分提出一結合影像定位和震動感測新型複合式動物行為量測系統。在震動行為量測方面,乃是應用一個小型加速度計(AnalogDevices ADXL202JE),將它固定在動物身上,直接量測動物的震動。此加速度計具有一理論值9.0mG 的解析度,故可測得相當微小的震動。量測信號同樣以串列資料形態傳進電腦並儲存。在分析軟體部分,只要將第一部分的軟體做些微修改,即可得到與前一複合式動物行為量測系統幾乎完全相同的動物行為參數,以利兩系統之間的比較。另外,為了配合新系統特性上的不同,一些動物行為參數在定義上會作一點改變。

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