利用逢機增殖多態性DNA進行大冠鷲和領角鴞性別鑑定

出版年份: 
2008年
主題類別: 
摘要: 

大冠鷲、領角鴞、鳳頭蒼鷹、黃魚鴞和草鴞為台灣保育類的鳥類,由於公母外表相似,在保育繁殖上常會因無法分辨性別而降低成功配對機會。因此本試驗目的為利用逢機增殖多態性 DNA (random amplified polymorphism DNA, RAPD) 開發新的大冠鷲與領角鴞性別鑑定分子標誌,並期能應用在鳳頭蒼鷹、黃魚鴞和草鴞等其他物種。
本試驗先分別以禽類 CHD1 (chromo-helicase-DNA-binding 1) 基因和 EE0.6 (EcoRI 0.6-kb fragment) 序列的性別特異基因引子對上述五種鳥類進行性別鑑定。另外,再以 RAPD 技術對大冠鷲和領角鴞進行指紋分析,尋找新的大冠鷲和領角鴞性別鑑別特異片段。
試驗結果顯示,大冠鷲和草鴞可利用 CHD1 基因正確鑑定性別。而 EE0.6 序列皆可對上述五種鳥類進行性別鑑定,其分別有效的引子組為:大冠鷲:A、B、C 及 D 組引子;鳳頭蒼鷹:A、C 及 D 組引子;領角鴞和黃魚鴞:E組引子;草鴞:C、D 和 F 組引子。在開發新的大冠鷲和領角鴞之性別特異片段方面,其中二隨機引子 OPBB08 及 OPAT15 分別能於雌大冠鷲增殖出約 1.2 和 1.3 kb 的性別特異片段,但於雄大冠鷲則否;一隨機引子 OPAN15 能於雌領角鴞增殖出約 1.3 kb 的性別特異片段,但於雄領角鴞則否。
根據選殖的雌性特異片段,分別設計性別鑑定引子組檢測 41 隻大冠鷲與 16 隻領角鴞。其中大冠鷲性別鑑定引子組 CseBB08-5a (Crested Serpent Eagle BB08-5a) 、CseBB08-5b、CseBB08-7 和 CseAT15 皆可於雌大冠鷲擴增一性別特異片段 (分別為553、895、194和734 bp),可準確分辨大冠鷲性別;且其中引子組 CseBB08-7 和 CseAT15 亦會在雌雄大冠鷲擴增一內在控制片段 (分別為 543 和 734 bp),以確定 PCR 反應操作正確性。而領角鴞性別鑑定引子組 CsoAN15-1 (Collared Scops Owl AN15-1) 和 CsoAN15-6 分別可於雌領角鴞擴增一性別特異片段 (分別為 789 和 349 bp),亦會在雌雄領角鴞擴增一內在控制片段 (分別為 543 和 734 bp),可有效作為領角鴞性別鑑定之引子組。大冠鷲性別鑑定引子組 CseBB08-5b 亦可跨物種限制在雌鳳頭蒼鷹擴增一條約 900 bp 片段,準確鑑定鳳頭蒼鷹性別。
本研究確立 EE0.6 序列在大冠鷲、領角鴞和黃魚鴞性別鑑定上的應用,並找到新的鑑定大冠鷲和領角鴞性別特異片段,發展出新的性別鑑定引子組可快速且準確地鑑定大冠鷲和領角鴞的性別。故利用上述引子組比起 CHD1 基因和 EE0.6 序列更能夠提供作為大冠鷲、領角鴞和鳳頭蒼鷹性別鑑定之用,以提高人工配對繁殖效率,進而達到對於這些台灣稀有的保育類野生動物的保育繁殖。此外,亦能夠對於研究這些鳥類行為、族群等研究有所幫助,提供更快速準確的性別鑑定方法。