持續感染於兔睪丸培養細胞之LPC株兔化豬瘟病毒之性狀及其組織培養疫苗之開發

外文標題: 
Persistent infection of LPC strain of lapinized hog cholera virus in rabbit testicle cell culture and the development of its tissue culture vaccine
校院系所: 
國立台灣大學獸醫研究所
指導教授: 
傅祖慧
出版年份: 
1988年
主題類別: 
摘要: 

為探討豬瘟病毒在培養細胞內持續感染的特性,及評估以此種病毒開發豬瘟組織培養
疫苗的可能性,將豬瘟兔化疫苗製造用LPC株病毒,直接接種於健康活兔睪丸內。
接種病毒後4天,摘取感染病毒睪丸,施行細胞培養,共每隔4至5天,將持續感染
病毒的兔睪丸細胞(簡稱持續感染細胞,RTP細胞)繼代1次,連續繼代420代

經電子顯微鏡(電顯)觀察,持續感染細胞的細胞質空泡與分泌性小泡內可發現病毒
顆粒。此外,持續感染細胞與同代數的正常兔睪丸細胞比較,其形態、染色體數目及
細胞超顯微結構,均無差異。持續感染細胞和接種A76株豬瘟病毒的RK-15豬
腎株化細胞,經鐵蛋白標示抗體處理後,以免疫電顯法檢查結果,發現鐵蛋白在這兩
種細胞內分佈情形大致相同,除散佈在細胞質外,並且聚積在內質網和粒線體等胞器
的胞膜及核膜上,此外,細胞質空泡內,也可見到與鐵蛋白結合的豬瘟病毒,但在高
氏器胞膜及其小池內存在的類似病毒顆粒,則未與鐵蛋白結合。經此電顯及免疫電顯
等觀察結果,推測豬瘟病毒在細胞核和高氏器之間組成後,進入高氏器,再藉細胞質
空泡或分泌性小泡輸送至細胞膜,釋放於細胞外。
自持續感染繼代第5代至第330代細胞(RTP5∼RTP330細胞)取得的病
毒(RTP5∼RTP330病毒),其力價為104.0 ∼105.75TCID50∕m
l,而接種RTP25至RTP330病毒的豬隻,都可耐過ALD株豬瘟強毒的攻
擊。這些病毒對豬隻的免疫效力約為104.5 PD50∕ml,其中RTP120病毒
或其後繼代之病毒,已無引起兔熱反應的特性。
以RTP15病毒在繼代15代的正常兔睪丸細胞增殖的病毒液,添加同量的BLP
(∕Buffered-lactose-pepone)保護劑所製成的冷凍乾燥
疫苗,其病毒含量為103.5 TCID50dose,對小豬的免疫效力可達103 P
D50∕dose,已符合我國「乾燥豬瘟組織疫苗檢驗標準」之規定。將力價約為1
04.5 TCID50∕dose的組織培養病毒水劑疫苗,及以市售的豬瘟兔化疫苗供
為對照,分別對294頭的小豬施行田間試驗,依免疫小豬中和抗體力價之消長及攻
毒試驗之結果比較,這兩種疫苗對小豬的免疫效力差異不明顯。
依據上述各項試驗結果,可確認LPC株病毒在兔睪丸細胞中,持續感染繼代所獲取
的病毒,適用於製備具有良好免疫效力的豬瘟組織培養疫苗。